光曲線（光響應(yīng)曲線）由一系列不同強(qiáng)度的照光步驟組成，通常光強(qiáng)是逐漸遞增的。在每個照光步驟結(jié)束時，執(zhí)行飽和脈沖分析。滯后光曲線(Hysteresis light curves，HLC)與傳統(tǒng)光曲線的區(qū)別在于它除了遞增的光強(qiáng)梯度系列外增加了遞減的光強(qiáng)梯度序列。通過對滯后光曲線光強(qiáng)遞增和遞減相的比較，可以量化由照射高光引起的滯后效應(yīng)，其大小和方向可以說明高光誘導(dǎo)的光合作用過程的激活以及隨后的恢復(fù)。對于絕大部分PAM而言，滯后光曲線的測量非常簡單，在Light Curve窗口點(diǎn)擊Edit編輯一個先遞增后遞減的照光序列，然后點(diǎn)擊Start即可開始測量。下面我們以雙通道葉綠素?zé)晒鈨xDUAL-PAM-100單通道測量Fluo為例，用圖文結(jié)合的方式將滯后光曲線的實驗流程分享給大家。實驗時間：200s-10min，如果需要能適應(yīng)，時間更長。
將葉片夾到激發(fā)和檢測單元中間，上表面朝向檢測單元。如果是測量藻類懸浮液，取1.4ml樣品，放到石英杯，然后將石英杯放到懸浮樣品架中間的樣品槽中，蓋上蓋子。打開Dual PAM的軟件，電腦會自動識別開放的端口，然后進(jìn)入下面的初始界面。Analysis Mode分析模式選擇：SP AnalysisDetector Type檢測器類型根據(jù)所用設(shè)備的具體配置選擇：DB或DRFluo Gain增益選擇：5(High)；Damping阻尼選擇：1ms(High)打開左下角的F ML，觀察軟件界面右邊紅色的Fluo數(shù)值是否在0.2以上，0.6以下，如果不在該范圍，切換到Meas.Light設(shè)置界面調(diào)整Fluo Meas.Light的Int.，使Fluo的數(shù)值在0.2-0.6范圍內(nèi)。
切換到Slow kin.設(shè)置界面，調(diào)整采點(diǎn)數(shù)和采點(diǎn)率，設(shè)置一個時間，該時間要長于滯后光曲線所需的總時間。以完整的滯后光曲線20步為例，如果單個光梯度的時間是30秒，所需的時間是10分鐘（600秒），因此上圖中Acquisition的Time：1280s是足夠的。切換到Sat.Pulse設(shè)置界面，檢查飽和脈沖的強(qiáng)度和持續(xù)時間。默認(rèn)設(shè)置Int.=6的強(qiáng)度高達(dá)10000 μmolm-2s-1，Width=300ms的持續(xù)時間足以飽和樣品，可滿足絕大部分實驗要求。
切換到Light Curve測量窗口，點(diǎn)擊軟件右邊的Edit，在彈出的對話框中編輯滯后光曲線的照光程序。第一列為Step（不可修改），完整的光曲線最多可以運(yùn)行20步。第二列為PAR（無需修改），光合有效輻射強(qiáng)度（μmolm-2s-1）；第三列Intens.（Intensity，修改后第二列會隨之變化）為光化光的檔位，對應(yīng)于強(qiáng)度檔位的PAR自動從當(dāng)前設(shè)置的PAR列表中獲取。滯后光曲線的照光協(xié)議要求光強(qiáng)先升高，后降低，因此我們需要先設(shè)置一個遞增的變光梯度，然后再把梯度降下來，以完整的20個Steps為例，10個遞增，10遞減，對稱設(shè)置。此時可以跳檔設(shè)置（1，4，6，8，11，13，15，16，17，18，18，17，16，15，13，11，8，6，4，1）；第四列Time/10s（可以修改），是每一個梯度下光強(qiáng)照射的時間，單位是10s，設(shè)置3，即每個光強(qiáng)梯度照30s。一般選擇相同的時間，Time設(shè)為0，0被視為停止符。光曲線會在這一步自動停止。設(shè)置完后即可點(diǎn)擊OK退出Edit對話框。在Light Curve窗口點(diǎn)擊Start，啟動滯后光曲線的測量，軟件會自動執(zhí)行先前編輯好的照光協(xié)議。測量完成后，可以在Repot查看，保存或?qū)С鰷蠊馇€的數(shù)據(jù)。上述實驗流程為最基本的操作步驟，如果您有更多細(xì)節(jié)問題需要咨詢可以聯(lián)系熟悉的技術(shù)工程師。更多PAM的使用技巧及參考文獻(xiàn)可以聯(lián)系我們，我們將竭誠為您提供滿意的服務(wù)。
